徠卡熒光顯微鏡的成像方式

徠卡熒光顯微鏡是利用一定波長的光使樣品受到激發(fā)，產(chǎn)生不同顏色的熒光，以用來觀察和分辨樣品中某些物質(zhì)及其性質(zhì)的一種顯微鏡，它在生物學(xué)和醫(yī)學(xué)中有著廣泛的用途。

徠卡熒光顯微鏡根據(jù)襯度形成的機制，對散射吸收像可以有兩種成像方式：

(一)明場成像法(BFI)，即只讓近軸區(qū)的透射電子柬通過物鏡光闌，形成亮背景上的暗圖形像。物鏡光闌的孔越小，明場像的襯度越大；(二)暗場成像法(DFI)，即只讓部分大角度的散射束或晶體的某衍射束通過物鏡光闌，而將透射束擋掉。這樣形成的是暗背景上的亮圖形像。這種暗場成像法可以提高圖像的襯度，是一種重要的成像方法。

徠卡熒光顯微鏡實現(xiàn)暗場成像的方法大致可分四種：(一)維持沿光軸垂直照明而移動物鏡光闌；(二)利用傾斜照明而取在光軸方向的散射束，這稱為中心暗場成像法(CDFI)；(三)采用中心擋束而有環(huán)形透光區(qū)的物鏡光闌；（四)用環(huán)形透光的聚光鏡光聞和中心圓孔形的物鏡光闌。這里*種方法zui簡便，但利用的是遠(yuǎn)袖區(qū)中的電子成像，故像差大，圖像質(zhì)量不會很好。第二法可避免上述缺點，但徠卡熒光顯微鏡的物鏡光闌接收到的只是一小部分散衍射電子，因此效率較低。又光闌的一側(cè)經(jīng)常受到大量電子轟擊，容易造成非對稱污染，從而影響圖像質(zhì)量。環(huán)形物鏡光閑在這方面有所改進(jìn)，但缺點是制作困難，且難以做到*軸對稱。鑒于對照明系統(tǒng)的要求相對放寬松，所以可采用zui后一個方案，在聚光鏡處加一個環(huán)形光闌，對樣品作空心柬照明。這種裝置的效果。它的圖像分辨率可與明場像的接近，而襯度又大大提高。

任何物質(zhì)的分子都是由原子組成的，原子又由原子核和核外電子組成。在一定的條件下，分子處于一定的能量狀態(tài)，分子的能量是由電子的能量Ee、原子核的振動能量Ek和分子的轉(zhuǎn)動能量EB組成，而且Ee＞Ek＞EB。

在室溫下分子處于zui低的能量狀態(tài)即單線基態(tài)，當(dāng)吸收光能以后，分子就產(chǎn)生能量的躍遷，由基態(tài)激發(fā)躍遷到*電子激發(fā)態(tài)或第二電子激發(fā)態(tài)。

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